病毒研究用水系列四：測(cè)序儀用水對(duì)結(jié)果的影響

基因測(cè)序技術(shù)是一種基因檢測(cè)技術(shù)，也被稱(chēng)為DNA測(cè)序技術(shù)，是進(jìn)行分子生物學(xué)研究和基因改造的基礎(chǔ)，也是解鎖人類(lèi)生命奧秘的重要方式之一?；驕y(cè)序技術(shù)發(fā)展了40余年，已在眾多領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用，包括生物的基因組圖譜繪制、物種進(jìn)化演替過(guò)程、表觀(guān)遺傳學(xué)、疾病相關(guān)基因的確定和診斷等等。近年來(lái)，基因測(cè)序相關(guān)產(chǎn)品和技術(shù)由實(shí)驗(yàn)室研究演變到臨床使用，為我們理解人類(lèi)生物學(xué)特征和疾病，評(píng)估遺傳疾病提供了關(guān)鍵性信息，所以說(shuō)基因測(cè)序技術(shù)是下一個(gè)改變世界的技術(shù)毫不為過(guò)。

    在疫情期間，這項(xiàng)技術(shù)得到了更多人的關(guān)注。疫情爆發(fā)初期，在不到一個(gè)月的時(shí)間內(nèi)，通過(guò)基因測(cè)序技術(shù)，病毒的基因組序列被公布，為分析病毒的進(jìn)化來(lái)源、致病機(jī)制提供了資料。不少?lài)?guó)家也發(fā)起了患者基因測(cè)序計(jì)劃，以了解個(gè)人基因?qū)Σ《靖腥痉磻?yīng)的影響，這項(xiàng)研究的數(shù)據(jù)將為患者護(hù)理及藥物處方提供信息，未來(lái)還可以幫助疫苗設(shè)計(jì)，從而拯救更多生命。

    整個(gè)測(cè)序環(huán)節(jié)中，從樣品收集到上機(jī)測(cè)序，水貫穿了包括測(cè)序儀的日常清洗維護(hù)和試劑配制在內(nèi)的每一個(gè)環(huán)節(jié)。作為一個(gè)*的基礎(chǔ)試劑，水的品質(zhì)對(duì)終測(cè)序結(jié)果會(huì)產(chǎn)生顯著影響。水中的雜質(zhì)，如無(wú)機(jī)鹽、有機(jī)物、核酸酶、顆粒物等，不僅會(huì)污染設(shè)備，縮短測(cè)序儀毛細(xì)管的使用壽命，而且還會(huì)降低DNA聚合酶的活性，終干擾測(cè)序結(jié)果的準(zhǔn)確性。

下面這些基因測(cè)序經(jīng)常遇到的問(wèn)題很有可能是使用的水有問(wèn)題，快來(lái)看看你有沒(méi)有中招…

Q1：DNA測(cè)序樣品用什么溶劑溶解比較好？

溶解DNA測(cè)序樣品，使用超純水溶解為宜。

原因： DNA的測(cè)序反應(yīng)的原理其實(shí)就是Taq酶的聚合反應(yīng)，需要一個(gè)合適的酶反應(yīng)條件。如果溶解DNA樣品的溶液含有過(guò)多的鹽，會(huì)影響測(cè)序反應(yīng)體系，造成Taq酶的聚合性能下降，干擾測(cè)序反應(yīng)甚至無(wú)法產(chǎn)生信號(hào)。

純水應(yīng)用Tips: 超純水機(jī)采用基因測(cè)序超純化柱，RephiLe配方填料的低鎂型純化柱，可以特異性去除水中的鎂離子，降低空白本底對(duì)測(cè)序反應(yīng)體系的影響。

Q2：測(cè)序結(jié)果怎么沒(méi)有峰圖呢？

原因：模板被降解，罪魁禍?zhǔn)卓赡苁菧y(cè)序使用的水中含有核酸酶。

純水應(yīng)用Tips: 制備超純水的超純水機(jī)需要帶有終端濾器，如樂(lè)楓生物的RephiBio終端濾器，可以去除DNA酶和RNA酶。

Q3：為什么測(cè)序峰圖出現(xiàn)了“瀑布效應(yīng)”？

“瀑布效應(yīng)”是基線(xiàn)突然從高處下降的現(xiàn)象。

原因：樣品被有機(jī)物污染，有機(jī)物會(huì)被激發(fā)產(chǎn)生熒光，抬高基線(xiàn)。

純水應(yīng)用Tips: 使用帶有TOC檢測(cè)系統(tǒng)的超純水機(jī),如樂(lè)楓Genie系列智能超純水系統(tǒng)，有機(jī)物含量低于5 ppb，采用全氧化法設(shè)計(jì)的TOC在線(xiàn)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)，在線(xiàn)監(jiān)測(cè)TOC含量，符合ISPE制藥工程指南 / 美國(guó)藥典USP等標(biāo)準(zhǔn)對(duì)于TOC檢測(cè)的要求。

Q4：“釘子峰”如何避免？

“釘子峰”是A、T、C、G四個(gè)顏色的峰都被突然拔起，形成的尖銳峰形。

原因： 溶液中可能存在氣泡或者顆粒，氣泡和顆粒對(duì)激光全反射，形成“釘子峰”。

純水應(yīng)用Tips: 純水機(jī)取水口配備0.22μm的終端濾器，測(cè)序之前使用超聲波對(duì)超純水進(jìn)行脫氣可以有效地防止“釘子峰”。

    樂(lè)楓生物Genie系列智能純水系統(tǒng)以穩(wěn)定的水質(zhì)、智能的操作系統(tǒng)充分滿(mǎn)足基因測(cè)序用水需求，在諸多應(yīng)用到測(cè)序儀的實(shí)驗(yàn)室常常會(huì)看到樂(lè)楓生物Genie系列智能超純水系統(tǒng)的身影。華大基因海外“火眼實(shí)驗(yàn)室”采用的超純水機(jī)是Genie 系列的超純水系統(tǒng)。